RESUMO
O biodiesel mineiro está sendo desenvolvido a partir de uma cultura bem mais simples e com custo bem mais baixo, a mamona. Há outra alternativa, também pioneira, igualmente viável e mais em conta ainda, que é o pinhão manso. O biodiesel é um combustível renovável, produzido a partir do processamento de sementes oleaginosas como o pinhão-manso. Objetivou-se avaliar o desenvolvimento de embriões de pinhão-manso cultivados in vitro em meio MS. Foram utilizadas sementes maduras de pinhão-manso apresentando comprimento de 2 a 4cm. Retirou-se a casca das sementes as quais foram submetidas a tratamentos com detergente neutro, enxágüe em água corrente, álcool 70% (v/v) durante 1’, e solução de hipoclorito de sódio 1% por 20’ e uma tríplice lavagem com água estéril. Embriões foram excisados e inoculados individualmente em tubos de ensaio contendo15 mL do meio de cultura MS com suplementação de sacarose a 3%, ágar a 0,6% e 3mg/L-1 de ácido giberélico com pH ajustado para 5,8 ± 1 antes de ser autoclavado a 120ºC, 1,2 atm, durante 20’. O desenvolvimento in vitro dos embriões será avaliado através de características de: comprimento da plântula, diâmetro do caule, número de folhas, comprimento e número de raízes. Com apenas oito dias de inoculação, as plântulas atingiram o comprimento médio de 4,5cm da parte aérea, 2,0cm do sistema radicular e cinco raízes. Espera-se que os embriões originem plântulas a fim de obter quantidade suficiente de material a exemplo de folhas e segmentos de caule, para futuros trabalhos com embriogênese somática, possibilitando a clonagem de pinhão-manso.Palavras-chave: cultura de tecidos, sementes, micropropagação e embriogênese somática
Claudinéia Ferreira Nunes 1
Moacir Pasqual 2
Dalilhia Nazaré dos Santos 3
Vantuil Antônio Rodrigues 4
Antônio Clarete de Oliveira 4
1 Engenheira Agrônoma, Mestranda em Fitotecnia/UFLA. nunescfr@yahoo.com.br
1 Engenheiro Agrônomo, Dr., Professor Titular/UFLA
1 Estudante de Graduação/ Agronomia/UFLA
1 Laboratista/UFLA
INTRODUÇÃO
O pinhão-manso(Jatropha curcas, L.) é uma espécie com elevado potencial de óleo obtido pelas sementes, matéria prima com grande demanda para a produção de "combustível verde", o biodiesel.A cultura de embriões é de grande importância para a realização de trabalhos com embriogênese somática do pinhão-manso, pois suas folhas e segmentos caulinares são desenvolvidos em condições assépticas isenta de micoorganismos.
O desenvolvimento de técnicas de reprodução, a exemplo da cultura de tecidos, consiste numa alternativa de reprodução de genótipos superiores. A cultura de tecidos constiui-se num conjunto de técnicas nas quais um explante é isolado e cultivado sob condições de plena assepsia, em um meio nutritivo artificial (Cestari, 1975;Hartman, Kester, Davies,1990; FAO, 1993; Pasqual et al., 1998). Entretanto, diversas partes da planta como gemas, meristemas apicais, embriões, segmentos de caule, extremidade de raízes e outras, podem ser cultivadas in vitro em meio nutritivo apropriado em ambiente asséptico (Grattapaglia & Machado, 1998).
O meio de cultura básico MS (Murashige e Skoog, 1962) é muito utilizado na propagação in vitro, promovendo resultados significativos na multiplicação de segmentos nodais, desenvolvimento de embriões e indução de embriogênese somática (Cordeiro, 1999; Ribeiro, 2001).
O presente trabalho teve como objetivo avaliar o desenvolvimento de embriões de pinhão-manso cultivados in vitro em meio MS.
MATERIAL E MÉTODOS
O experimento foi implantado em junho de 2005 no laboratório de Cultura de Tecidos Vegetais do Departamento de Agricultura da Universidade Federal de Lavras (UFLA), em Lavras-MG. Foram utilizadas Sementes maduras de pinhão-manso apresentando comprimento de 2 a 4cm.Com o auxílio de um descascador retirou-se as cascas das sementes deixando expostos seus cotilédones, depois foram submetidas a um tratamento de assepsia com detergente neutro, enxágüe em água corrente utilizando uma peneira média, em seguida tratadas com álcool 70% (v/v) durante 1 minuto, e transferidas para uma solução de hipoclorito de sódio 1% por 20 minutos. Fez-se uma última assepsia das sementes na câmara de fluxo laminar horizontal, passando-as por três lavagens em água destilada estéril (autoclavada), mantendo a quarta água.
Com auxílio de bisturi, pinça e placa de petri estéril, os tegumentos das sementes foram separados longitudinalmente pela região oposta à micrópila, tomando-se o cuidado de não provocar danos aos embriões. Os embriões, independentemente dos estádios em que se encontravam, foram excisados e inoculados individualmente em tubos de ensaio (150x25mm) contendo 15 mL do meio MS (Murashige & Skoog,1962) com suplementação de sacarose a 3%, ágar a 0,6% e 3mg/L-1 de ácido giberélico com pH ajustado para 5,8 ± 1 antes de ser autoclavado a 120ºC, 1,2 atm, durante 20 minutos. O meio de cultura básico MS é muito utilizado na propagação in vitro, promovendo resultados satisfatórios no desenvolvimento de embriões. Após a inoculação, os tubos foram transferidos para sala de crescimento com temperatura de 26± 1°C.
Os embriões inoculados em meio nutritivo estão em fase de avaliações. O desenvolvimento in vitro dos embriões será avaliado através de características de: comprimento da plântula, diâmetro do caule, número de folhas, comprimento e número de raízes, levando-se em consideração o estádio de maturação dos embriões.
Quando os embriões atingirem o estádio de planta formada, as folhas e segmentos do caule serão utilizados para instalação de experimentos de embriogênese somática.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Com apenas oito dias de inoculação, as plântulas atingiram o comprimento médio de 4,5cm da parte aérea, 2,0cm do sistema radicular e cinco raízes. Estes resultados, coletados nos primeiros 08 dias após a instalação do experimento, são ainda preliminares, uma vez que o mesmo está em fase de avaliação.RESULTADOS ESPERADOS
Espera-se que os embriões originem plântulas a fim de obter quantidade suficiente de material a exemplo de folhas e segmentos de caule, para futuros trabalhos com embriogênese somática, possibilitando a clonagem do pinhão-manso.Futuros trabalhos de melhoramento genético com pinhão-manso poderão ser viabilizados fazendo-se uso da técnica de cultura de embriões.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
CESTARI, A. N.1975. Cultura de tecidos . Ciência e cultura, 27(10):1056-1069.CORDEIRO, A.T. Embriogênese somática indireta e fusão interespecífica de protoplastos em Coffea. Viçosa: UFV, 1999. 11p. (Tese-Doutorado em fisiologia Vegetal).
FAO.1993. Ex situ storage of seeds, pollen and in vitro cultures of perennial woody plant species. v.113. 83 pp.
GRATTAPAGLIA, D.; MACHADO, M. A. 1998. Micropropagação. In:Torres, A.C.; Caldas, L.S. Técnicas e aplicações da cultura de tecidos de plantas. Brasília: EMBRAPA/CNPH. p.100-161.
HARTMAN, H. T.; KESTER, D. E.; DAVIES JR, F. T. D. 1990. Plant propagation: principles and practices. Prentice-Hall/ Englewood Cliffs, New Jersey. 5 ed. p. 459-521.
MURASHIGE, T.; SKOOG, F. A revised médium for rapid growth and biossay with tobacco tissue culture. Physiologia Plantarum, Copenhagen, v.15, n.3, p.473-497, Mar.1962.
PASQUAL, M.; RAMOS, J. D.; HOFFMAN, A.; CARVALHO, G. R. 1998.Cultura de tecidos vegetais: tecnologia e aplicações – meios de cultura. Lavras: UFLA/FAEPE. 127 p.il.